Development and validation of an LC-MS/MS method for determination of 8-iso-prostaglandin f2 Alpha in human saliva

J Med Biochem. 2022 Oct 15;41(4):466-473. doi: 10.5937/jomb0-33556.

Abstract

Background: Increased formation of reactive oxygen species may be caused by the ion release of the metal alloys used in prosthetic dental restorations due to the corrosion process. As products of lipid peroxidation, isoprostanes can be used as a marker for oxidative stress in the body. There are two significant advantages of using isoprostanes as an oxidative stress marker - presence in all fluids in the body and low reactivity. Saliva provides noninvasive, painless, and cost-effective sample collection and can be used as an alternative testing medium of blood and urine.

Methods: This study presents the development and validation of a sample LC-MS/MS method to quantify 8-isoprostaglandin F2-a in human saliva using salt-out assisted liquid-liquid extraction (SALLE).

Results: The selected sample preparation procedure optimized chromatographic separation and mass detection provided high recovery and sensitivity of the analysis. The calibration curve was obtained in the predefined range 25-329 ng/L with R2 larger than 0.995. Normalized matrix varied between 89.7 % and 113.5%. The method showed sufficient accuracy and precision - accuracy in the range 89.7 %-113.9 %, and precision between 2.3% and 5.4%.

Conclusions: The proposed method is validated according to current EMA/FDA industrial guidance for bioanalysis and offers an appropriate level of sensitivity and sufficient accuracy and precision.

Uvod: Povećano formiranje reaktivnih vrsta kiseonika može biti uzrokovano oslobađanjem jona iz metalnih legura koje se koriste u zubnim protezama, a usled procesa korozije. Kao rezultat peroksidacije lipida, izoprostani se mogu koristiti kao marker oksidativnog stresa u telu. Postoje dve značajne prednosti upotrebe izoprostana kao markera oksidativnog stresa - prisustvo u svim tečnostima u telu i niska reaktivnost. Pljuvačka omogućava neinvazivno, bezbolno i isplativo uzimanje uzoraka i može se koristiti kao alternativni medijum za testiranje (alternativa testovima krvi i urina).

Metode: Ova studija predstavlja razvoj i validaciju uzorka LC-MS/MS metode za kvantifikaciju 8-izoprostaglandina F2-a u ljudskoj pljuvački korišćenjem tečno-tečne ekstrakcije koja je potpomognuta ispoljavanjem (SALLE).

Rezultati: Odabrana procedura pripreme uzorka je optimizovala hromatografsko odvajanje a detekcija mase je obezbedila visok povraćaj i osetljivost analize. Kalibraciona kriva je dobijena u unapred definisanom opsegu 25-329 ng/L sa R2 većim od 0,995. Normalizovana matrica je varirala između 89,7 % i 113,5 %. Metoda je pokazala dovoljnu tačnost i preciznost - tačnost u rasponu od 89,7 %-113,9 %, a preciznost između 2,3 % i 5,4 %.

Zaključak: Predložena metoda je validirana u skladu sa važećim uputstvima EMA/FDA za bioanalizu i nudi odgovaraju}i nivo osetljivosti i dovoljnu tačnost i preciznost.

Keywords: 8-isoPGF2a; LC-MS/MS; SALLE; metal alloy; saliva.