Objective: To develop the method of biological fluids' sample processing and mebeverine detection to exclude false results' receiving when diagnosing drug intoxication.
Material and methods: The study was carried out using «Mebeverine» (NJCO «North star», Russia) medicine and hydrolysis by enzymes, namely papain, chymotrypsin, trypsin, chymopsin and hyaluronidase, was applied for sample processing. The extractions were analyzed by methods of HPLC-MS/MS on Nexera XR modular liquid chromatograph with LCMS-8050 (Shimadzu) tandem mass spectrometer and GC-MS on gas chromatograph connected with QP-2020 (Shimadzu, Japanese) mono quadrupole mass spectrometer.
Results and conclusion: It has been revealed that using selective method of sample processing, which consists of aqueous phase extraction at pH=2-4 and enzymatic hydrolysis by papain and hyaluronidase during isolation from blood, is required to detect mebeverine in biological liquids. It has been proven that the native mebeverine is hydrolyzed to veratric (3.4-dimethoxybenzoic) acid and mebeverine alcohol at alkalotic pH value of medium. It has been shown that mebeverine extraction is necessary to study using HPLC-MS/MS, which will allow to avoid the native mebeverine degradation in chromatograph injector as with GC-MS method analysis.
Цель исследования: Разработка методики пробоподготовки биологических жидкостей и обнаружения мебеверина для исключения получения недостоверных результатов при диагностике наркотического опьянения.
Материал и методы: Исследование проводили с использованием препарата «Мебеверин» (НАО «Северная звезда», Россия), для пробоподготовки объектов применяли гидролиз ферментами: папаин, химотрипсин, трипсин, химопсин и гиалуронидаза. Извлечения анализировали с помощью методов ВЭЖХ-МС/МС на модульном жидкостном хроматографе Nexera XR с тандемным масс-спектрометром LCMS-8050 (Shimadzu) и ГХ-МС на газовом хроматографе, соединенном с моноквадрупольным масс-спектрометром QP-2020 (Shimadzu, Япония).
Результаты и выводы: Выявлено, что для обнаружения мебеверина в биологических жидкостях требуется применение частной методики пробоподготовки, которая состоит в проведении экстракции при pH=2—4 среды водной фазы и ферментативного гидролиза папаином или гиалуронидазом при извлечении из крови; доказано, что при щелочных значениях pH среды происходит гидролиз нативного мебеверина до вератровой (3,4-диметоксибензойной) кислоты и мебеверинового спирта; показано, что исследование извлечений на мебеверин необходимо проводить с использованием ВЭЖХ-МС/МС, что позволит избежать деградации нативного мебеверина в инжекторе хроматографа, как при анализе с помощью метода ГХ-МС.
Keywords: HPLC-MS/MS; false positive result; immunochromatographic method; mebeverine.