Objective: Chronic myeloid leukemia (CML) is a disease caused by the acquisition of BCR-ABL1 fusion in hematopoietic stem cells. In this study, we focus on the oncofetal ENOX2 protein as a potential secretable biomarker in CML.
Materials and methods: We used cell culture, western blot, quantitative RT-PCR, ELISA, transcriptome analyses, and bioinformatics techniques to investigate ENOX2 mRNA and protein expression.
Results: Western blot analyses of UT-7 and TET-inducible Ba/F3 cell lines demonstrated the upregulation of the ENOX2 protein. BCR-ABL1 was found to induce ENOX2 overexpression in a kinase-dependent manner. We confirmed increased ENOX2 mRNA expression in a cohort of CML patients at diagnosis. In a series of CML patients, ELISA assays showed a highly significant increase of ENOX2 protein levels in the plasma of patients with CML compared to controls. Reanalyzing the transcriptomic dataset confirmed ENOX2 mRNA overexpression in the chronic phase of the disease. Bioinformatic analyses identified several genes whose mRNA expressions were positively correlated with ENOX2 in the context of BCR-ABL1. Some of them encode proteins involved in cellular functions compatible with the growth deregulation observed in CML.
Conclusion: Our results highlight the upregulation of a secreted redox protein in a BCR-ABL1-dependent manner in CML. The data presented here suggest that ENOX2, through its transcriptional mechanism, plays a significant role in BCR-ABL1 leukemogenesis.
Amaç: Kronik myeloid lösemi (KML), hematopoietik kök hücrelerde BCR-ABL1 füzyon geninin ortaya çıkması ile oluşan bir hastalıktır. Bu çalışmada, KML’de potansiyel bir salgılanabilir biyobelirteç olan onkogen fetal ENOX2 proteinine odaklanılmıştır.
Gereç ve yöntemler: ENOX2 mRNA ve protein ekspresyonunu araştırması için hücre kültürü, Western blot, kantitatif RT-PCR, ELISA, transkriptom analizleri ve biyoinformatik teknikler kullanılmıştır.
Bulgular: UT-7 ve TET indüklenebilir Ba/F3 hücre hatlarında yapılan Western blot analizleri, ENOX2 proteininin ekspresyonunun arttığını göstermiştir. BCR-ABL1’in ENOX2 gen ifadesini kinaz bağımlı olarak artırdığı gösterilmiştir. KML diagnoz hastaları kohortunda ENOX2 mRNA ekspresyonunun arttığı doğrulanmıştır. KML hastalarına ait kan örneklerinde yapılan ELISA testleri, KML hastalarının plazmalarında kontrol grubuna kıyasla ENOX2 protein seviyelerinde anlamlı bir artış olduğunu göstermiştir. Transkriptomik veri setlerinin yeniden analiz edilmesiyle hastalığın kronik fazında ENOX2 mRNA ekspresyonunun arttığı doğrulanmıştır. Biyoinformatik analizlerle, BCR-ABL1 bağlamında ENOX2 ile pozitif korelasyon gösteren, KML’de gözlenen bölünme deregülasyonunda hücresel işlevlere katılan çeşitli genler tanımlanmıştır.
Sonuç: Bulgularımız KML’de BCR-ABL1-bağımlı şekilde salgılanan ENOX2 redoks proteininin ifadesinin arttığını göstermektedir. Burada sunulan veriler, ENOX2’nin transkripsiyonel mekanizması yoluyla BCR-ABL1 lösemi oluşumunda önemli bir rol oynadığını göstermektedir.
Keywords: CML; ENOX2; Biomarker; Chronic myeloid leukemia; Redox protein; Secreted protein.
©Copyright 2023 by Turkish Society of Hematology | Turkish Journal of Hematology, Published by Galenos Publishing House