Objective: Platelet-rich plasma (PRP) is used in multiple coagulation disorders. Its therapeutic effectiveness relies on technical procedures related to PRP procurement and preservation because free radicals induce platelet activation and aging. This work aims to elucidate the oxidative mechanisms involved in activation of platelets obtained from PRP during storage.
Materials and methods: One hundred ten PRP batches were obtained from healthy donors and kept under stirring at a temperature of 20-24 °C. Protein extraction was performed from platelet homogenates and plasma at different times of storage from day 1 to 20. The activities of antioxidant markers such as catalase (CAT), superoxide dismutase, and ceruloplasmin, as well as fibrinolytic protein activity metalloproteases 2 and 3, plasmin, and urokinase plasminogen activator, were analyzed by zymography assays. Oxidized proteins were also determined.
Results: Significant activity of antioxidant enzymes and fibrinolytic molecules was observed on day 5 of storage in PRP homogenates, which increased over time and was concomitantly correlated with oxidized protein levels. Reverse enzymatic activity patterns were observed in plasma, except for CAT, which remained unchanged.
Conclusion: Storage conditions of platelets from PRP for up to 5 days induced in vitro platelet activation by oxidative damage and proteolysis. This finding confirms the need for proper management of these blood products to preserve their viability and functionality.
Amaç: Trombositten zengin plazma (TZP) pek çok koagülasyon bozukluğunda kullanılır. TZP’nin etkinliği, üretimi ve saklanması sırasındaki teknik işlemlere bağlıdır; çünkü serbest radikaller trombositin aktivasyonunu ve yaşlanmasını tetikler. Bu çalışma, TZP’den elde edilen trombositlerin, depolama sırasındaki aktivasyonunda yer alan oksidatif mekanizmaların aydınlatılmasına odaklanmıştır.
Gereç ve yöntemler: Sağlıklı donörlerden 110 TZP örneği hazırlandı ve karıştırıcı eşliğinde 20-24 ˚C’de tutuldu. Trombosit homojenatından ve plazmadan, depolamanın 1. gününden 20. gününe kadar farklı zamanlarda protein ekstraksiyonu yapıldı. Katalaz, superoxit dismutaz ve seruloplazmin gibi antioksidan belirteçlerin aktiviteleri yanı sıra metaloproteaz 2, ve 3, plazmin ve ürokinaz plasminojen aktivatör gibi fibrinolitik proteinlerin aktiviteleri, zimografi testiyle analiz edildi; ayrıca oksidize olmuş proteinler belirlendi.
Bulgular: TZP homojenatının depolama süresinin 5. gününde, antioksidan enzimler ve fibrinolitik moleküllerde belirgin bir aktivite gözlendi; bu durum zamanla daha da arttı ve oksidize protein düzeyleri ile eş zamanlı bir ilişki gösterdi. Plazmada ise katalaz haricinde tersine bir enzimatik aktivite paterni gözlendi; katalaz değişmeden kaldı.
Sonuç: TZP'deki trombositlerin depolama koşulları, 5 güne kadar in vitro trombosit aktivasyonunu, oksidatif hasar ve proteoliz yoluyla tetikler; bu bulgu bu kan ürününün canlılığının ve fonksiyonlarının korunması için kurallara uygun davranılması gerekliliğini desteklemektedir.
Keywords: Platelet storage; Platelet activation; Platelet-rich plasma; Oxidative damage; Metalloproteases.
©Copyright 2023 by Turkish Society of Hematology | Turkish Journal of Hematology, Published by Galenos Publishing House