Objective: Some studies have performed in vitro neutrophil isolation from feline blood. The major limiting factor for these studies is the small volume of blood that can be collected without development of potentially life-threatening complications. In the present study we attempted neutrophil isolation from feline venous blood samples using discontinuous Percoll gradients.
Material and methods: Blood was collected from the cephalic vein of clinically healthy adult cats. The blood samples were layered on Percoll dilutions (72 %, 63 %, 54 % and 45 %). After centrifugation, the feline polymorphonuclear leukocytes (PMN) accumulated as a band between 72-63 % Percoll dilutions. The total cell count was calculated using light microscopy counts. The percentage of the neutrophils was determined microscopically after staining with Diff-Quik stain. Neutrophil viability was evaluated with a 0.01 % Trypan blue assay. The activation was determined based on intact cell morphology in the isolated neutrophils.
Results: The mean PMN number was 22 x 105 per ml (minimum - maximum: 20-26 x 105/ml). Neutrophil homogeneity was > 95 % in the cell suspensions. The viability of isolated neutrophils was > 98 %. The technique did not result in neutrophil activation.
Conclusion and clinical relevance: Discontinuous Percoll gradients (72 %, 63 %, 54 % and 45 %) can be used to isolate neutrophils from blood samples of cats. The technique was simple to perform and neutrophil activation was minimal.
ZIEL:: In einigen Studien wurden in vitro neutrophile Granulozyten aus Katzenblut isoliert. Der wichtigste limitierende Faktor für diese Studien ist das geringe Blutvolumen, das sich ohne Entwicklung potenziell lebensbedrohlicher Komplikationen gewinnen lässt. In dieser Studie versuchten wir, neutrophile Granulozyten aus venösen Katzenblutproben mit diskontinuierlichen Percoll-Gradienten zu isolieren.
Material und methoden: Venöses Blut wurde aus der Vena cephalica von erwachsenen klinisch gesunden Katzen entnommen. Die Blutproben wurden auf Percoll-Verdünnungen geschichtet (72 %, 63 %, 54 % und 45 %). Nach dem Zentrifugieren akkumulierten die polymorphkernigen Leukozyten (PMN) als Bande zwischen den Percoll-Verdünnungen 72 % und 63 %. Die Gesamtzellzahl wurde manuell unter Verwendung eines Lichtmikroskops ausgezählt. Der Prozentsatz der neutrophilen Granulozyten wurde mikroskopisch nach Diff-Quik-Färbung bestimmt und die Lebensfähigkeit der neutrophilen Granulozyten mit einer 0,01 %igen Trypanblau-Färbung bewertet. Grundlage für die Bestimmung der Aktivierung war eine intakte Zellmorphologie der isolierten neutrophilen Granulozyten.
Ergebnisse: Die mittlere PMN-Zahl betrug 22 x 105 Zellen/ml (Minimum – Maximum: 20–26 x 105 Zellen/ml). Die Reinheit an neutrophilen Granulozyten betrug in den Zellsuspensionen > 95 %. Die Lebensfähigkeit der isolierten neutrophilen Granulozyten lag bei > 98 %. Die Technik führte nicht zu einer Aktivierung der Neutrophilen.
Schlussfolgerung und klinische relevanz: Der Einsatz der diskontinuierlichen Percoll-Gradienten (72 %, 63 %, 54 % und 45 %) ist geeignet, um neutrophile Granulozyten aus venösem Katzenblut zu isolieren. Die Technik ließ sich einfach durchführen und die Neutrophilenaktivierung war minimal.
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