Background: MEN-1 is a rare autosomal dominant disease caused by mutations in MEN1 gene encoding the menin protein. This syndrome is characterized by the occurrence of parathyroid tumors, gastroenteropancreatic neuroendocrine tumors, pituitary adenomas, as well as other endocrine and non-endocrine tumors. If a patient with the MEN-1 phenotype carry no mutations in the MEN1 gene, the condition considers a phenocopy of syndrome (phMEN1). The possible cause of this changes could be changes in epigenetic regulation, particularly in microRNA expression that might affect menin signaling pathways.
Aim: to identify differently expressed circulating miRNAs in plasma in patients with genetically confirmed MEN-1 syndrome, its phenocopies and healthy controls.
Materials and methods: single-center, case-control study was conducted. We assessed plasma microRNA expression in patients with genetically confirmed MEN-1 (gMEN1), phMEN1 and healthy controls. Morning plasma samples were collected from fasting patients and stored at -80°C. Total RNA isolation was performed using miRNeasy Mini Kit with QIAcube. The libraries were prepared by the QIAseq miRNA Library Kit following the manufacturer. Circulating miRNA sequencing was done on Illumina NextSeq 500 (Illumina). Subsequent data processing was performed using the DESeq2 bioinformatics algorithm.
Results: we enrolled 21 consecutive patients with gMEN1 and 11 patients with phMEN1, along with 12 gender matched controls. Median age of gMEN1 was 38,0 [34,0; 41,0]; in phMEN1 - 59,0 [51,0; 60,0]; control - 59,5 [51,5; 62,5]. The gMEN1 group differed in age (p<0.01) but not gender (р=0.739) or BMI (р=0.116) compared to phMEN1 and controls group, the last two groups did not differ by these parameters (p>0.05). 25 microRNA were differently expressed in groups gMEN1 and phMEN1 (21 upregulated microRNAs, 4 - downregulated). Comparison of samples from the phMEN-1 group and relatively healthy controls revealed 10 differently expressed microRNAs: 5 - upregulated; 5 - downregulated. In the gMEN-1 and control groups, 26 differently expressed microRNAs were found: 24 - upregulated; 2 - downregulated. The miRNAs most differing in expression among the groups were selected for further validation by RT-qPCR (in the groups of gMEN1 vs phMEN1 - miR-3613-5p, miR-335-5p, miR-32-5p, miR-425-3p, miR-25-5p, miR-576-5p, miR-215-5p, miR-30a-3p, miR-141-3p, miR-760, miR-501-3p; gMEN1 vs control - miR-1976, miR-144-5p miR-532-3p, miR-375; as well as in phMEN1 vs control - miR-944, miR-191-5p, miR-98-5p).
Conclusion: In a pilot study, we detected microRNAs that may be expressed differently between patients with gMEN-1 and phMEN-1. The results need to be validated using different measurement method with larger sample size.
ОБОСНОВАНИЕ: ОБОСНОВАНИЕ. Синдром множественных эндокринных неоплазий 1 типа (МЭН-1) — редкое аутосомно-доминантное заболевание, обусловленное мутациями в гене MEN1, кодирующем белок менин. Этот синдром характеризуется возникновением опухолей околощитовидных желез, гастроэнтеропанкреатических нейроэндокринных опухолей, аденом гипофиза, а также других эндокринных и неэндокринных опухолей. Если пациент с МЭН-1 фенотипом не имеет мутаций в гене MEN1, то такое состояние рассматривается как фенокопия синдрома (фМЭН-1). Возможной причиной этих изменений могут быть изменения в эпигенетической регуляции, в частности в экспрессии микроРНК, которые могут влиять на сигнальные пути менина.
ЦЕЛЬ: ЦЕЛЬ. Определить циркулирующие микроРНК, различно экспрессирующиеся в плазме крови у пациентов с генетически подтвержденным синдромом МЭН-1, его фенокопиями и контролем.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ: МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Выполнено одноцентровое исследование типа «случай-контроль». Проведена оценка экспрессии микроРНК в плазме крови пациентов с генетически подтвержденным синдромом МЭН-1 (гМЭН-1), фМЭН-1 и относительно здорового контроля. Забор крови проводился натощак, образцы цельной крови однократно центрифугировались и хранились при температуре -80°С. Выделение тотальной РНК проводили с помощью набора miRNeasy Mini Kit с QIAcube. Библиотеки готовили с помощью набора QIAseq miRNA Library Kit в соответствии с инструкцией производителя. Секвенирование циркулирующих микроРНК проводили на Illumina NextSeq 500 (Illumina). Последующую обработку данных проводили с помощью биоинформационного алгоритма DESeq2.
РЕЗУЛЬТАТЫ: РЕЗУЛЬТАТЫ. Всего в исследование были включены в группу гМЭН-1 — 21 пациент, в группу фМЭН-1 — 11 пациентов, в группу контроля — 12 относительно здоровых добровольцев. Медиана возраста в группе гМЭН-1 составила 38,0 лет [34,0; 41,0]; в группе фМЭН-1 — 59,0 [51,0; 60,0]; в группе контроля — 59,5 [51,5; 62,5]. Все группы не отличались по полу (р=0,739) и индексу массы тела (р=0,116). Группа гМЭН-1 отличалась по возрасту от пациентов фМЭН-1 и контрольной группы (p<0,001). В результате высокопроизводительного секвенирования было получено 25 различно экспрессирующихся микроРНК в группах гМЭН-1 и фМЭН-1 (21 микроРНК с повышенной экспрессией, 4 — с пониженной). При сравнении образцов от групп фМЭН-1 и относительно здорового контроля выявлено 10 различно экспрессирующихся микроРНК: 5 — с повышенной экспрессией в группе фМЭН-1 по сравнению с контрольной группой, 5 — с пониженной. В группах гМЭН-1 и контроля обнаружено 26 различно экспрессирующихся микроРНК: 24 с повышенной экспрессией в группе гМЭН-1 по сравнению с контролем, 2 — с пониженной. Для дальнейшей валидации результатов методом RT-qPCR были отобраны наиболее отличающиеся по экспрессии микроРНК среди групп (в группах гМЭН-1 и фМЭН-1 — miR-3613-5p, miR-335-5p, miR-32-5p, miR-425-3p, miR-25-5p, miR-576-5p, miR-215-5p, miR-30a-3p, miR-141-3p, miR-760, miR-501-3p; в группах гМЭН-1 и контроля — miR-1976, miR-144-5p miR-532-3p, miR-375; а также в группах фМЭН-1 и контроля — miR-944, miR-191-5p, miR-98-5p).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: ЗАКЛЮЧЕНИЕ. В ходе пилотного исследования методом высокопроизводительного секвенирования обнаружены микроРНК, экспрессия которых может отличаться у пациентов с гМЭН-1, фМЭН-1 и контролем. Полученные результаты нуждаются в валидации при помощи другого метода оценки экспрессии микроРНК на большей выборке пациентов.