Basis of acute pharyngitis pathogenesis is an inflammatory process at the entrance gate of the infection. Therefore, local immunity study proves to be the most informative. Difficulty in making that type of assessment is lack of generally accepted reference values and biological sampling techniques.
Objective: Validation of biological sampling techniques to study the parameters of local mucosal immunity in oropharynx acute inflammatory diseases.
Material and methods: 30 people with acute catarrhal pharyngitis with intoxication syndrome were examined. The sampling was carried out in 7 different ways. 1. Collect saliva samples using the passive drool collection method. 2. Collect saliva, using cotton swabs placed into the mouth for 3 minutes. 3. Cotton swabs wrapped around a metal probe was placed on palatine tonsils and lateral walls of the oropharynx. 4. Instead of a cotton swab, a disc of laboratory filter paper with a diameter of 0.7 cm was used. 5. Scrape by the mucous membrane of the palatine tonsils and lateral walls of the oropharynx were made with a cytobrush. 6. Using a cytobrush, scrapings were made from the mucous membrane of only the posterior pharyngeal wall, excluding the region of the palatine tonsils. 7. Using a cytobrush to make scrapings from the only palatine tonsils mucous membrane. RT-PCR was used to determine IL-1β mRNA.
Results: Minimal IL-1β mRNA values were detected in saliva collected by passive flow (0.095 [0; 3.45] units) and on a cotton swab (0.21 [0.1; 3.82] units). IL-1β mRNA in the material collected by methods No. 3 and No. 4 on a cotton swab and a paper disk did not differ significantly from each other. Its level was higher than in saliva and lower than in scrapings. The maximum result was revealed with method No. 5 when simultaneously taking scrapings from the palatine tonsils and posterior pharyngeal wall mucous membrane (4.76 [0.92; 8.13] units). The expression of IL-1β mRNA in the material obtained by methods No. 6 and No. 7 did not differ significantly from each other.
Conclusion: Separated scrapings collecting from the palatine tonsils or posterior pharyngeal wall mucous membrane will allow assessing the inflammatory response autonomously in the lymphoid tissue and separately on the mucosa of the posterior pharyngeal wall. The mucosal scraping technique was the most effective for assessing cytokines in the oropharyngeal mucosal membrane.
Основой патогенеза острого фарингита служит воспалительный процесс в месте входных ворот инфекции. Поэтому наиболее информативным является изучение показателей местного иммунитета. Сложность проведения такого рода исследований заключается в отсутствии общепринятых референсных значений исследуемых показателей и стандартизированной методики взятия биологического материала для этих тестов.
Цель исследования: Валидизировать методики забора биологического материала для исследования параметров местного иммунитета слизистой оболочки при острых воспалительных заболеваниях ротоглотки.
Материал и методы: Обследованы 30 человек с диагнозом острого фарингита. Забор материала проводили 7 способами: 1) собирали слюну пассивным потоком; 2) собирали слюну на ватном тампоне, помещенном в полость рта на 3 мин; 3) ватный тампон на металлическом зонде поочередно прикладывали на переднюю поверхность небных миндалин и боковых валиков глотки с двух сторон; 4) вместо ватного тампона использовали диск из лабораторной фильтровальной бумаги диаметром 0,7 см; 5) зондом-цитощеткой производили соскобы со слизистой оболочки задней стенки глотки в области боковых валиков и небных миндалин; 6) зондом-цитощеткой производили соскобы со слизистой оболочки только задней стенки глотки, исключая область небных миндалин; 7) зондом-цитощеткой производились соскобы со слизистой оболочки только небных миндалин. Методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени определяли содержание мРНК IL-1β.
Результаты: Минимальные значения мРНК IL-1β наблюдались в слюне, собранной пассивным потоком (0,095 [0; 3,45] усл. ед.) и на ватный тампон (0,21 [0,1; 3,82] усл. ед.). Значения мРНК IL-1β в материале, полученном при способах №3 (на ватном тампоне) и №4 (на бумажном диске), статистически значимо не различались между собой, уровень был выше, чем в слюне, и ниже, чем в соскобах. Максимальный результат получен при способе №5 при одновременном взятии соскоба со слизистой оболочки небных миндалин и боковых валиков задней стенки глотки (4,76 [0,92; 8,13] усл. ед.). Уровни экспрессии мРНК IL-1β в материале, полученном при способах №6 и №7, статистически значимо не различались между собой.
Выводы: Разобщенное взятие соскобов со слизистой оболочки небных миндалин или боковых валиков задней стенки глотки позволит при необходимости оценить воспалительный ответ автономно в лимфоидной ткани и отдельно на слизистой оболочке задней стенки глотки. Методика взятия соскобов со слизистой оболочки была наиболее эффективной для оценки уровня цитокинов ткани слизистой оболочки ротоглотки.
Keywords: cytokines; interleukins; local immune response; mucous membrane of the oropharynx; palatine tonsils; real-time polymerase chain reaction (RT-PCR).