HPLC-TBARS-EVSC (high-performance liquid chromatography-thiobarbituric acid reactive substances-ex vivo stratum corneum) protocol: Selection of the subjects and approach to present the results

Int J Cosmet Sci. 2023 Oct;45(5):647-654. doi: 10.1111/ics.12874. Epub 2023 Jun 29.

Abstract

Objective: Nowadays, it is recognized the need for improved safety and efficacy protocols to evaluate the human stratum corneum (SC) and its interaction with topical and cosmetic formulations by minimally or non-invasive methodologies. The aim of our research work was to streamline the HPLC-TBARS-EVSC (high-performance liquid chromatography-thiobarbituric acid reactive substances-ex vivo stratum corneum) methodology, by exploring the results of a group of 18 subjects.

Methods: The study included nine women and nine men aged between 19 and 57 years old with phototypes from II to V. Sites in the forearm of each volunteer were randomly delimited, and the SC was collected by tape stripping. HPLC was used to quantify the MDA-TBA2 (malondialdehyde-thiobarbituric acid) adduct from the tape-stripped SC, irradiated and not by an ultraviolet (UV) simulator chamber.

Results: Observing the findings of our present investigation, and the statistical approach applied, the use of the ratio between the treatment site and control would be an adequate strategy to better discriminate and evaluate the results. Additionally, an optimal selection of the volunteers to respond specifically to the purpose of the ex vivo assay also can be considered advantageous.

Conclusions: It seemed that in future studies focusing on the impact of SC UV-induced lipid peroxidation, determined by the HPLC-TBARS-EVSC, the most suitable subjects are females aged less than 35 years old, with phototype II.

Objectif: Aujourd'hui, il est nécessaire d'améliorer les protocoles de sécurité d’emploi et d'efficacité pour évaluer le stratum corneum (SC) humain et son interaction avec les formulations topiques et cosmétiques par des méthodologies peu ou pas invasives. L'objectif de notre travail de recherche était de rationaliser la méthodologie HPLC-TBARS-SCEV, à savoir chromatographie en phase liquide à haute performance (High Performance Liquid Chromatography), substances réactives à l'acide thiobarbiturique (Thiobarbituric Acid Reactive Substances), stratum corneum ex vivo (SCEV), en explorant les résultats d’un groupe de 18 sujets. MÉTHODES: L'étude incluait 9 femmes et 9 hommes âgés de 19 à 57 ans présentant des phototypes II à V. Des sites de l'avant-bras de chaque volontaire ont été délimités de manière aléatoire, et le SC a été recueilli par « tape stripping ». La chromatographie en phase liquide à haute performance a été utilisée pour quantifier l'adduit MDA-TBA2 (malondialdéhyde - acide thiobarbiturique) à partir du SC recueilli par « tape stripping », irradié et non irradié par une chambre de simulation à ultraviolets (UV). RÉSULTATS: En observant les résultats de notre recherche actuelle et l'approche statistique appliquée, l'utilisation du rapport entre le site traité et le site contrôle serait une stratégie adéquate pour mieux discriminer et évaluer les résultats. En outre, une sélection optimale des volontaires pour répondre spécifiquement à l'objectif du test ex vivo peut également être considérée comme bénéfique.

Conclusions: Il semble que dans les études futures axées sur l'impact de la peroxydation lipidique induite par UV du SC, déterminé par la méthodologie HPLC-TBARS-SCEV, les sujets les plus appropriés sont les femmes âgées de moins de 35 ans présentant un phototype II.

Keywords: age differences; chemical analysis; gender differences; phototype differences; skin physiology/structure; statistics.

MeSH terms

  • Adult
  • Chromatography, High Pressure Liquid / methods
  • Cosmetics*
  • Epidermis*
  • Female
  • Humans
  • Male
  • Malondialdehyde
  • Middle Aged
  • Thiobarbituric Acid Reactive Substances
  • Young Adult

Substances

  • Thiobarbituric Acid Reactive Substances
  • Malondialdehyde
  • Cosmetics